Терапевтическая эффективность Липоферона липосомального в профилактике и лечении вирусных инфекций

Липоферон – липосомированный препарат рекомбинантного α-2b интерферона – хорошо переносится больными и имеет высокую эффективность как в профилактике, так и лечении вирусных инфекций (грипп, ОРВИ, гепатиты В и С). Естественный путь введения (через рот) делает препарат незаменимым в педиатрической практике и при амбулаторном лечении.

Рекомбинантные α₂-интерфероны (ИФН) обладают антивирусной, противоопухолевой и иммуномодулирующей активностью. Препараты ИФН широко применяются в комплексной терапии вирусных, бактериальных и онкологических заболеваний человека. Для достижения терапевтического эффекта необходимы ежедневные инъекции высоких доз препарата – от 1-2 до 50 млн МЕ, так как протеазы крови и других биологических жидкостей организма быстро разрушают ИФН. Парентеральное введение высоких доз ИФН часто сопровождается повышением температуры, ознобом, утомляемостью, кожными высыпаниями, лейко- и тромбоцитопенией и другими побочными эффектами. Так, при лечении хронического гепатита С побочные эффекты наблюдаются у 72% больных.

Создание препаратов рекомбинантного ИФН, не вызывающих побочных эффектов, – крайне актуальная проблема. Одним из подходов к решению этой сложной задачи является липосомирование, т. е. заключение ИФН в липосому. На международном фармрынке уже представлен липосомальный амфотерицин В для лечения системных микозов, противоопухолевые липосомальные препараты – даунорубицин, доксорубицин, цисплатин. Целый ряд препаратов находится на завершающих фазах клинических испытаний: липосомальные вакцины против гриппа и меланомы, противодиабетический комплекс инсулин-липосомы, противовирусные нуклеозиды для лечения СПИДа, серия липосомальных бронхорасширяющих препаратов и др. Эти препараты значительно менее токсичны, чем нелипосомированные.

Достоинства липосом как носителей лекарств состоят в том, что, полученные из природных фосфолипидов, они в отличие от полимерных систем доставки лекарств полностью биодеградируемы и биосовместимы. Включенные в липосомы лекарственные вещества оказываются более устойчивыми в организме, так как изолированы липидной мембраной от повреждающих воздействий, в частности от разрушения в желудочно-кишечном тракте, поэтому в меньшей степени оказывают общетоксическое действие на организм. Уникальной особенностью липосом является возможность доставки лекарственных препаратов внутрь клеток, с которыми они взаимодействуют, путем слияния или эндоцитоза. Особый интерес вызывает возможность орального применения липосомальных белковых препаратов.

Специалисты ДГУ «Вектор-Фарм» ГНЦ ВБ «Вектор» в течение 10 лет разрабатывали и внедряли в медицинскую практику липосомальный генно-инженерный α-2b ИФН (торговое название в Украине – Липоферон) для перорального применения. В состав препарата Липоферон входят только фармацевтически приемлемые компоненты. Препарат выгодно отличается отсутствием в составе альбумина, способного вызывать аллергические реакции. Пероральное применение Липоферона надежно защищает организм больного от риска передачи инфекций (ВИЧ, вирусы гепатитов В, С (ВГВ, ВГС)) при инъекциях. Также отсутствует психоэмоциональный фактор, характерный для инъекций, особенно у детей. Готовая форма препарата представляет собой лиофильно высушенный продукт, восстанавливающий липосомальную структуру при добавлении воды.

Доклинические исследования

В результате доклинического исследования было установлено, что ИФН, заключенный в липосомы, сохраняет биологическую активность в желудочно-кишечном тракте и всасывается в кровь. По скорости всасывания ИФН, заключенный в липосомы и применяемый перорально, оказался близок к свободному ИФН, вводимому внутримышечно, но в остальном фармакокинетика препаратов заметно отличалась. Так, например, высокий уровень накопления ИФН в сыворотке крови мышей регистрировался через 1 ч независимо от применяемой лекарственной формы препарата. Липосомальный ИФН отличался более длительным периодом циркуляции в крови лабораторных животных, его период полувыведения составлял 6 ч, в то время как у Реаферона-ЕС – 3 ч. К 6 ч уровень ИФН в сыворотке крови после введения Реаферона падал до фоновых значений, после введения Липоферона это происходило к 9 ч, с последующим новым подъемом к 15 ч.

Клиническая апробация препарата

Исследования, проведеные в ЦНИИЭ МЗ РФ на базе 2-й клинической инфекционной больницы г. Москвы, в Московском НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ, Военно-медицинской академии г. Санкт-Петербурга, НИИ гриппа РАМН г. Санкт-Петербурга, Институте иммунологии ГНЦ МЗ РФ, Краснодарской краевой клинической больнице, Краснодарской детской краевой клинической больнице, Новосибирской государственной медицинской академии, Кубанской государственной медицинской академии, показали клиническую эффективность липосомального ИФН и практическое отсутствие побочных эффектов.

Лечение острого вирусного гепатита В

В клинических испытаниях Липоферона у больных острым вирусным гепатитом В (ОВГВ) средней степени тяжести в клинике ЦНИИ МЗ РФ было установлено, что препарат в дозе 1 млн МЕ за 30 мин до еды два раза в день в течение 10 дней хорошо переносился больными и в отличие от Реаферона-ЕС, вводившегося внутримышечно в той же дозе два раза в день, не вызывал каких-либо токсических или аллергических реакций. В ходе апробации осуществлялся ежедневный общеврачебный осмотр. Клинические и биохимические исследования проводились до начала лечения, после 10 дней терапии и при выписке. Кровь на маркеры вируса гепатита В (исследование методом иммуноферментного анализа) для верификации диагноза ОВГВ бралась до лечения и на HBsAg повторно перед выпиской.

Содержание α- и γ-ИФН в сыворотке крови больных показало, что оба препарата ИФН являются его индукторами. При этом индуцирующий эффект Липоферона оказался выше, чем у Реаферона-ЕС. Так, в группе больных, получавших Липоферон, содержание α-ИФН повысилось через 10 дней лечения в 4 раза, а при в/м введении – в 2,5 раза по сравнению с исходным уровнем. Индуцирующий эффект, но менее выраженный, оказывали оба препарата и на γ-ИФН. Следует отметить, что длительность желтушного периода в группе больных, получавших препарат Липоферон, была короче на 7 дней, чем у принимавших Реаферон-ЕС.

Оба препарата оказывали положительное влияние на элиминацию HBsAg из крови. При приеме ИФН как перорально, так и внутримышечно HBsAg не определялся более чем у половины больных к моменту выписки из стационара, в то время как в контрольной группе, получавших традиционное лечение, лишь у одной трети больных.

Таким образом, при ОВГВ терапевтическая эффективность Липоферона, применяемого перорально, не уступала Реаферону-ЕС, вводимому парентерально, а по ИФН-индуцирующему действию даже превосходила его.

Лечение хронического гепатита В

Проведенные в Московском НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ клинические испытания Липоферона показали, что липосомальная форма ИФН при пероральном применении в дозе 500 тыс. МЕ детям до 7 лет и 1 млн МЕ школьникам два раза в день в течение 10 дней и затем в течение 1 мес через день один раз в сутки на ночь эффективна в комплексной терапии больных хронической ВГВ-инфекцией в активной и неактивной репликативных формах, ассоциированной с гломерулонефритом, и по эффективности не уступает инъекционному Реаферону-ЕС в тех же дозах. Побочных эффектов Липоферона не было отмечено, препарат хорошо переносился больными. При использовании Липоферона у некоторых больных отмечалось улучшение со стороны клинико-лабораторных проявлений как гепатита, так и гломерулонефрита. Пероральное применение препарата было значительно удобнее и избавляло детей от нежелательных стрессовых нагрузок, исключало риск передачи инфекций через шприц (ВГВ, ВГС, ВИЧ).

Терапевтическая эффективность Липоферона при лечении как острого, так и хронического гепатита В подтверждалась и в других многочисленных исследованиях, выполненных в Кубанской государственной медицинской академии, Новосибирской государственной медицинской академии. Во всех исследованиях отмечалась хорошая переносимость препарата и взрослыми, и детьми.

Лечение гепатита С

В ЦНИИЭ МЗ РФ проведены клинические испытания Липоферона в монотерапии и комбинации с рибавирином при лечении хронического вирусного гепатита С (ХВГС). В исследование были включены 64 больных ХВГС (25 женщин и 39 мужчин). Первая группа (32 человека) получала Липоферон по 2 млн МЕ через день перорально; вторая (32) – комбинированную терапию с рибавирином в дозе 800-1000-1200 мг/сут в зависимости от массы тела. Длительность терапии составляла 6 мес. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о хорошей переносимости препарата. Липоферон как при монотерапии, так и в комплексе с рибавирином оказывал положительное влияние на клиническое течение заболевания: быстро улучшалось самочувствие, повышалась работоспособность, исчезали астеновегетативные явления, геморрагический синдром, уменьшалась частота и выраженность гепатолиенального синдрома, улучшалось качество жизни больных. Липоферон способствовал снижению уровня ферментемии уже ко 2-4-й неделе приема препарата; к окончанию 6-месячного курса лечения у 66,7% больных отмечалась либо нормализация уровня ферментов, либо снижение активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) на 50% и более по сравнению с исходным уровнем. Выявлено индуцирующее влияние препарата на систему эндогенного ИФН, проявляющееся в повышении α₂-ИФН в 1,5-2 раза от исходного уровня к концу первого месяца терапии. Установлено положительное влияние Липоферона на клеточные и гуморальные факторы иммунитета: препарат оказывал модулирующее влияние на экспрессию СD4, СD56, СD16, повышал фагоцитарную активность лимфоцитов и стимулировал синтез иммуноглобулинов G.

Профилактика гриппа и ОРЗ

Новые лекарственные средства с этиотропной направленностью действия по мере накопления положительных результатов клинических наблюдений неизбежно рассматриваются в перспективе расширения масштабов их использования не только для терапии инфекционных больных, но и для здоровых людей с целью экстренной профилактики – превентивного лечения заболеваний. При этом возникают дополнительные требования к препаратам, способам и условиям их применения. Если при лечении больных под наблюдением врача нередко приходится мириться с нежелательными побочными эффектами препаратов и небезопасными инвазивными методами их введения, то при профилактическом назначении этиотропных веществ здоровым людям подход, разумеется, должен быть иным.

При выборе условий экстренной профилактики (защищаемых контингентов, времени начала и продолжительности профилактических курсов) решающее значение имеет вероятность инфицирования защищаемых людей с последующим развитием заболевания. Она велика в эпидемических очагах, во вновь формируемых коллективах, особенно в периоды всеобщих эпидемий или сезонных подъемов заболеваемости при отсутствии, неиспользовании или недостаточной эффективности средств специфической профилактики – вакцин.

Арсенал средств неспецифической защиты против множества этиологически самостоятельных ОРВИ пока не велик: несколько антивирусных препаратов, быстродействующих индукторов эндогенного ИФН, препаратов экзогенного α₂-ИФН.

Новый генно-инженерный препарат Липоферон липосомальный обладает противовирусной и иммуномодулирующей активностью. По механизму действия ИФН относятся к цитокинам. Их синтез натуральными киллерами, клетками моноцитарного ряда и дендритными клетками предшествует формированию специфических иммунных реакций.

Препарат был использован с целью экстренной профилактики гриппа и других ОРВИ в НИИ гриппа МЗ РФ (г. Санкт-Петербург).

Под наблюдением находился коллектив интернатного типа (военное училище), в котором было 625 молодых мужчин в возрасте от 18 до 28 лет. Общение курсантов внутри коллектива на занятиях, в казармах и т. д. было интенсивным, а контакты с населением города в период наблюдения – ограниченными.

Вакцинация против гриппа в данном коллективе не проводилась.

Перед началом курса профилактического применения препаратов, шифрованных по номерам серии, каждую из 30 учебных групп разделили по таблице случайных чисел на 2 подгруппы по 10-12 человек. Случайным способом определили, какая из подгрупп получит препарат одной серии, а какая – другой.

Такое распределение наблюдаемого контингента обеспечивало равную вероятность инфицирования возбудителями респираторных инфекций в каждой подгруппе. Таким образом, единицей выборки была рандомизированная подгруппа (кластерный метод), единицей наблюдения – человек.

Исследуемые препараты – Липоферон и плацебо. Раскрытие шифра поступило после составления итоговых таблиц и статистической обработки результатов. Ампула с препаратом содержала 500 000 МЕ основного препарата, а также лецитин (75 мг), холестерин (10 мг), витамины Е (10 мг) и С (15 мг), сахарозу, натриевые соли хлоридов и фосфатов. В ампуле плацебо содержались те же вещества, за исключением рекомбинантного α₂-ИФН. Непосредственно перед использованием для восстановления липосомальной структуры в ампулы добавляли по 2 мл дистилированной воды, встряхивали 1-5 мин до образования однородной суспензии.

Препараты применяли перорально за 30 мин до обеда 2 раза в неделю. Наблюдение продолжалось 8 нед, включая период профилактического курса приема препаратов, и еще в течение 4 нед после курса.

Ежедневно проводился опрос всех наблюдаемых о состоянии здоровья и субъективной оценке переносимости препаратов. Перед приемом препаратов осуществлялся медицинский осмотр курсантов с измерением температуры тела. Выявленные больные находились до выздоровления в стационаре медицинской службы училища, где получали традиционное лечение, но без прерывания профилактического курса.

Для определения этиологии гриппозных заболеваний проводили серологические исследования парных проб крови 31 больного с использованием реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и ИФА. Вирусологически с целью изоляции вирусов гриппа исследованы носоглоточные смывы от 24 больных.

В ходе исследований установлено, что переносимость ИФН была хорошей, не наблюдалось ни одного случая жалоб и не выявлено объективных данных о побочных явлениях и аллергических реакциях.

В марте-апреле 2002 г., во время проведения данного исследования, в г. Санкт-Петербурге наблюдались разрозненные вспышки гриппа и острых респираторных заболеваний (ОРЗ) в отдельных коллективах. Всего в наблюдаемом нами коллективе гриппом и ОРЗ переболело 109 человек (17,8%). Из числа лабораторно обследованных больных по данным ИФА с учетом микст-инфекций грипп типа А подтвержден в 6 случаях (19,3%), типа В – у 9 больных (29,0%), аденовирусная инфекция – у 25,8%, парагрипп 1 типа – у 16,1%, РС-вирусная инфекция – у 6,4%.

Таким образом, гриппоподобные заболевания в коллективе имели разную этиологию с превалированием вирусов гриппа В.

До начала приема препаратов группы наблюдения (основная и контрольная) по показателям заболеваемости ОРВИ не отличались друг от друга. С первой недели приема препаратов произошло снижение заболеваемости в защищаемой группе по сравнению с контрольной. В течение всего курса в основной группе заболело 24 человека (7,7±1,5%), в контрольной – 53 (17,5±2,2%). Различия между группами статистически достоверны (р<0,001). Кратность различий (индекс эффективности) составила 2,2 раза, коэффициент эффективности (показатель защищенности) – 54,0%.

Некоторое положительное последствие, отмеченное в течение 4 нед по окончании профилактического курса, статистически не достоверно (р>0,05). Однако важно заметить, что повышение заболеваемости в основной группе не зафиксировано. В противном случае следовало бы считать, что профилактический курс фактически не защитил восприимчивых людей, а просто отодвинул на некоторое время сроки заболевания. Поскольку повышения заболеваемости после завершения курса в защищаемой группе не произошло, то можно полагать, что под защитой Липоферона значительная часть восприимчивых к определенным вирусам людей перенесла инфекционный процесс в бессимптомной, клинически не проявляющейся форме с развитием долговременного специфического иммунитета.

Таким образом, курс экстренной профилактики обеспечивает отнюдь не эфемерную защиту, и после его окончания остается полезный иммунологический след.

Наряду со снижением вероятности заболевания в основной группе отмечено более легкое течение тех случаев ОРВИ, которые не удалось предотвратить. Средняя продолжительность лихорадки у больных в основной группе составила 2,2 дня, в контрольной – 2,8 (р<0,05), температура ≥38,6 °С – у 1 (5,5%) и у 6 больных (14,8%), средняя продолжительность болезни – 5,0±0,4 и 6,3±0,5 дней соответственно, число осложнений – 16,7±7,6 и 26,4±6,1%. При пероральном приеме Липоферона липосомального по схеме 2 раза в неделю в течение 4 нед отмечена хорошая его переносимость, отсутствие побочных явлений и аллергических реакций.

Таким образом, профилактический прием препарата способствовал снижению частоты ОРВИ в 2,2 раза (р<0,001), более легкому течению заболеваний, сокращению вероятности осложнений. Поскольку по окончании курса заболеваемость не возрастала, то есть все основания полагать, что восприимчивые люди перенесли под защитой Липоферона клинически не проявившиеся формы инфекционного процесса с последующим развитием стойкого специфического иммунитета.

Лечение гриппа и ОРЗ

В структуре инфекционных заболеваний в РФ грипп и другие ОРЗ занимают ведущее место. Специфическая профилактика гриппа не принесла ожидаемого результата ввиду уникальной изменчивости вируса гриппа. К тому же вытеснение в результате вакцинации наиболее активного возбудителя ОРЗ (грипп) привело к росту заболеваемости сопряженными ОРЗ (парагрипп, аденовирусная и РС-вирусная инфекции). Этот факт, а также иммуносупрессирующее действие респираторных вирусов обусловливают необходимость поиска препаратов с универсальным противовирусным и иммуномодулирующим действием. К таким препаратам относятся ИФН, в том числе рекомбинантные.

Рекомбинантный α-2b ИФН обладает противовирусной (изменение синтеза РНК, ДНК и белков) и иммуномодулирующей (повышает фагоцитарную активность макрофагов, усиливает специфическое цитотоксическое действие лимфоцитов на клетки-мишени) активностью. Эти свойства препарата являются определяющими для использования его в терапии вирусных заболеваний, в том числе вирусных заболеваний респираторного тракта. Липосомальная форма препарата улучшает его адсорбцию на поверхности и проникновение внутрь эпителиальных клеток. Представляется целесообразным при ОРЗ и гриппе использовать пероральное применение как наиболее легко дозируемое и доступное в употреблении, а также обеспечивающее длительную циркуляцию ИФН в крови с дальнейшей индукцией эндогенного ИФН. Все это позволило рассматривать препарат в качестве средства лечения больных гриппом и другими ОРЗ, особенно со снижением иммунитета (частые ОРЗ в анамнезе, осложненное течение ОРЗ и др.).

Исследование проводилось как сравнительное двойное слепое рандомизированное плацебо контролируемое.

Критерии включения в исследование:

• больные гриппом и другими ОРЗ средней степени тяжести с неосложненным к моменту поступления течением:
  • температура тела 38,0 °C;
  • наличие симптомов общей инфекционной интоксикации (слабость, недомогание, головная боль, миалгия и артралгия, снижение аппетита);
  • наличие симптомов поражения дыхательных путей (ринит, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, бронхиолит);
  • длительность заболевания не более 72 ч;
  • возраст больных от 18 до 50 лет;
  • добровольное согласие пациента на участие в клиническом испытании;
  • отсутствие осложнений заболевания.

Согласно критериям включения была сформирована группа из 80 пациентов по мере их поступления. Из них 40 пациентов получали перорально липосомальную форму рекомбинантного α-2b ИФН (Липоферон липосомальный), 40 человек – плацебо (липосомы без ИФН). Шифровку препарата по серийным номерам производил ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Группы добровольцев были сопоставимы по полу и возрасту.

Липоферон липосомальный назначали внутрь по 500 000 ЕД ежедневно два раза в сутки в течение первых трех дней лечения. В контрольной группе больные получали плацебо с той же кратностью и длительностью.

Все пациенты независимо от группы исследования получали симптоматическое лечение в полном объеме (режим, диета, поливитамины, антигриппин, по показаниям – сосудосуживающие капли в нос, жаропонижающие, противокашлевые и отхаркивающие средства).

Больным аденовирусной инфекцией с явлениями гнойного тонзиллита назначали антибактериальные препараты (бензилпенициллин по 500 000 ЕД 6 раз в сутки внутримышечно, при непереносимости β-лактамов – макролиды).

В случае отсутствия положительного эффекта или недостаточного эффекта после окончания лечения по протоколу (на 4-й день лечения), а также при развитии осложнений пациенту назначали любое необходимое лечение.

Учет основных клинических симптомов и синдромов заболевания производили до начала лечения и в течение всего периода пребывания больного в стационаре.

Лабораторные и инструментальные методы исследования были выполнены в полном объеме.

Эффективность препаратов оценивали на основании частоты встречаемости и длительности основных синдромов (симптомов) заболевания, частоты развития осложнений (носовые кровотечения, синуиты, пневмония и др.), динамики лабораторных показателей.

При этом учитывали сроки нормализации температуры и исчезновения симптомов общей инфекционной интоксикации, сроки обратного развития синдромов поражения респираторного тракта и возникновение осложнений в процессе лечения.

В сравниваемых группах больных с одинаковой частотой наблюдались случаи заболевания гриппом, аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекциями, что делает эти группы сопоставимыми по этиологии заболевания.

Количество больных, поступивших в различные сроки от начала заболевания, было сопоставимо в исследуемых группах.

Сравниваемые группы были сопоставимы по величине лихорадочной реакции и выраженности синдрома общей инфекционной интоксикации при поступлении (перед началом приема препаратов).

Полученные данные свидетельствуют, что средняя продолжительность симптомов общей инфекционной интоксикации (слабость, недомогание, снижение аппетита, головная и мышечная боль) была достоверно меньше в группе больных, получавших Липоферон липосомальный. Выраженность и длительность температурной реакции были одинаковы в обеих сравниваемых группах.

Была выявлена достоверно меньшая длительность кашля у больных, получавших Липоферон липосомальный, что, вероятно, связано с меньшей длительностью бронхита, который выявляли на основании аускультативного исследования больных (сухие и влажные среднепузырчатые хрипы). У больных, получавших этот препарат, средняя длительность бронхита на 0,9 дня была меньше, чем у больных, получавших плацебо. Отсутствие достоверности этого различия связано с малой частотой встречаемости бронхита в сравниваемых выборках – у 13 (33,3%) и 11 (27,5%) обследованных больных в сравниваемых группах соответственно.

В динамике заболевания к периоду реконвалесценции (7-10-е сутки заболевания) у больных, получавших рекомбинантный ИФН, отмечено достоверно менее выраженное уменьшение относительного количества сегментоядерных нейтрофилов), а также достоверно менее выраженное увеличение относительного количества эозинофилов и лимфоцитов в периферической крови. Это может косвенно свидетельствовать о наличии у препарата Липоферон липосомальный при пероральном его применении системных иммуномодулирующих эффектов, а также противовирусного действия (уменьшение лимфопролиферации), что коррелирует со статистически значимым снижением длительности продуктивного кашля и частоты встречаемости бактериальных осложнений.

Обобщая результаты клинического изучения препарата Липоферон, следует отметить, что препарат хорошо переносится больными и имеет высокую эффективность как при профилактике так и при лечении вирусных инфекций (грипп и ОРВЗ, гепатит В, гепатит С). Естественный путь введения – через рот делает препарат незаменимым в педиатрической практике и при амбулаторном лечении.

Список литературы находится в редакции.