Набор реактивов для определения концентрации мочевины в биологических жидкостях инструкция, аналоги и состав

Принцип методу

Сечовина з діацетилмонооксимом у кислому середовищі в присутності тіосемікарбозиду та іонів трьохвалентного заліза утворює забарвлений комплекс. Інтенсивність забарвлення пропорційна концентрації сечовини в пробі.

Дослідний матеріал

Свіжа сироватка крові або разведена сеча. Сечу перед дослідженням фільтрують, розводять фізрозчином у співвідношенні 1:25-1:100 і результат множать на розведення.

Склад набору

1 .Реактив №1 - розчин діацетилмонооксиму.

2.Реактив №2 - розчин тіосемікарбозиду та солі заліза.

3.Калібрувальний розчин сечовини 16,65 ммоль/л.

4.Сірчана кислота.

5.Трихлороцтова кислота 50%.

Характеристики набору

Лінійність        до 25 ммоль/л.

Коефіцієнт варіації не більше 5%.

Час інкубації    10 хв при 100°С.

Стабільність забарвлення не. менше 15 хв.

Приготування робочого розчину

У колбу на 100 мл влити близько 50 мл дистильованої води, кількісно додати вміст однієї ампули з реактивом №1 та однієї ампули з реактивом №2. Перемішати й одразу довести дистильованою водою до мітки. Перелити в посуд для зберігання. Зберігати при +1°С-+5°С до 10 днів, у посуді із темного скла.

Розчин сірчаної кислоти

У колбу на 200 мл влити близько 100 мл дистильованої води, кількісно додати вміст флакону із сірчаною кислотою. Перемішати і довести дистильованою водою до мітки. Розчин стабільний.

Розчин трихлороцтової кислоти (5% -й)

У колбу на 50 мл влити близько 30 мл дистильованої води, кількісно додати вміст ампули з трихлороцтовою кислотою. Перемішати і довести дистильованою водою до мітки. Розчин стабільний.

Проведення аналізу

Внести в пробірки досліджувані біологічну рідину та реагенти згідно з таблицею, не порушуючи послідовності:

Реакційні суміші ретельно перемішують, закривають ковпачками з алюмінієвої фольги та інкубують протягом 10 хвилин на киплячій водяній бані. Після закінчення інкубації проби охолоджують під проточною водою і вимірюють оптичну щільність дослідної і калібрувальної проби проти контрольної проби в кюветах з товщиною поглинаючого шару 5 мм при довжині хвилі 540 нм. Забарвлення стабільне протягом 15 хвилин після закінчення інкубації. Розраховують концентрацію сечовини за формулою:

Ед

С =      • 16,65 [мМоль/л],

Екал

де Ед і Екал - екстинції досліджуваного зразка та калібрувального розчину, виміряні відносно контрольної проби.

При визначенні сечовини в ліпімічній або гемолітичній сироватці пробу депротеїнізують 5%-ю трихлороцтовою кислотою. Для цього 0,1 мл сироватки змішують з 1,0 мл трихлороцтової кислоти і центрифугують. Таким же чином готують пробу з калібрувальним розчином сечовини. Для аналізу використовують 0,1 мл надосадової рідини. Використовуючи трихлороцтову кислоту, можна досліджувати і цілісну кров.

Нормальні значення:

для сироватки - 2,5÷8,3 ммоль/л;

 для сечі - 330÷580 ммоль/доб.

Примітки.

1.  Не порушуйте послідовності змішування реактивів: до робочого розчину спочатку додайте розчин сірчаної кислоти, тільки потім - досліджувану рідину.

2.  Температура водяної бані повинна бути 100°С.

3.  Якщо вміст сечовини в сироватці крові вище 20 ммоль/л, сироватку розводять фізіологічним розчином, а результат множать на розведення.

4.  Ампули з розчином діацетилмонооксиму (реактив №1), з розчином трихлороцтової кислоти та флакон з сірчаною кислотою відкривати у витяжній шафі.

5.  При великій кількості досліджень для приготування робочого розчину використовують відразу дві ампули з реактивом №1 і дві ампули з реактивом №2, розчиняючи їх у 200 мл дистильованої води.

6.  При малій кількості досліджень рекомендується окремо розчинити ампулу з реактивом №1 і реактивом №2 у 50 мл води кожну і зберігати розчини в посудинах із темного скла до двох місяців. Робочий розчин готувати, змішуючи ці розчини в рівних пропорціях.

Термін і умови зберігання

Реактиви, з яких складається набір, зберігаються при температурі +1-+5°С. Термін придатності набору 12 місяців від дня виготовлення. Не застосовувати після закінчення терміну придатності.