Загадочный помощник – ИФА

Наверняка, Вы неоднократно сталкивались с этой загадочной аббревиатурой - ИФА. Давайте разберемся с тем, что это за метод, какова специфика проведения анализа, в каких случаях оправдано его назначение и в чем могут помочь его результаты.

Что такое иммуноферментный анализ (ИФА)?

На сегодняшний день среди иммунологических методов диагностики лидирующее положение занимает иммуноферментный анализ – ИФА. Иммуноферментный анализ (ИФА) это лабораторное исследование, которое основано на реакции “антиген-антитело”, а точнее - на высокой избирательности и специфичности иммунологических реакций. Суть этого лабораторного метода - определение специфических антител с помощью специальных биохимических реакций, которые помогают определить не только присутствие или отсутствие антител, но и их количество. Благодаря проведению анализа, можно определить уровень гормонов, иммуноглобулинов, иммунологических комплексов и других биологически активных веществ. Для исследования на антитела может использоваться кровь, спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и т.д. Метод ИФА является одним из наиболее активно развивающихся направлений лабораторной диагностики. Высокая стабильность реагентов, простота способов регистрации и многие другие достоинства метода ИФА способствовали его широкому внедрению в различные области медицины, сельского хозяйства, биологической промышленности, а также в многочисленные научные исследования. Как любой метод лабораторный диагностики, ИФА имеет свои достоинства и недостатки. К достоинствам ИФА можно отнести высокую чувствительность (90%), специфичность (95%), достаточно простую воспроизводимость, унифицированность и пригодность для массовых обследований. Также к его преимуществам можно отнести возможность выявлять наличие инфекции любой локализации и проследить в динамике ход заболевания, возможность инструментально оценить результаты анализа, что устраняет фактор субъективности. К недостаткам метода, прежде всего, относится то, что он является непрямым, то есть определяется не возбудитель, а иммунный ответ на него, который может иметь индивидуальные вариации.

Каков механизм реакции?

Иммуноферментный анализ (ИФА) основан на обнаружении антигенов возбудителя или антител к ним в патологическом материале или сыворотке крови. Среди различных модификаций ИФА, в настоящее время, наибольшее распространение получили конкурентный метод, который применяется в анализе гормонов, и метод двойного связывания, который активно используется в серодиагностике инфекций. В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом, а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению уровня этой активности. Необходимо отметить, что для каждой тест-системы есть свои показатели учета результатов, поэтому при оценке результатов необходимо ориентироваться на показатели нормы и патологии конкретной тест-системы, применявшейся для исследования.

Что можно выявить методом ИФА?

Метод иммуноферментного анализа используется для определения наличия антигенов возбудителей различных инфекций и для определения наличия антител классов (IgA, IgM, IgG) к антигенам различных возбудителей (вирусные гепатиты, ВИЧ, сифилис, TORCH, хламидиозы, паразиты). С помощью ИФА можно определить антитела к любой инфекции, при условии, конечно, что организм их выработал. Этот метод позволяет различать острые и хронические формы заболеваний, выделять стадию заболеваний и выявлять практически здоровых носителей. Необходимо заметить, что наличие антител в сыворотке крови или в патологическом материале может свидетельствовать лишь о контакте организма с возбудителем в настоящее время или в прошлом.

Каковы закономерности иммунологического ответа?

Человеческий организм вырабатывает антитела (иммуноглобулины) пяти типов, но клиническое значение имеют только три из них: IgA, IgM , IgG. IgA - основной иммуноглобулин, выделяемый слизистыми оболочками, играет барьерную роль. IgM - первый иммуноглобулин, отвечающий на внедрение инфекции и являющийся маркером остроты процесса. IgG - основной иммуноглобулин в сыворотке крови, который служит для долговременной защиты от инфекций. Аутоантитела тоже относятся к классу IgG. Итак, организм встретился с инфекционным агентом, либо начался аутоиммунный процесс. С момента внедрения микроорганизма в человеческий организм и до момента появления антител в сыворотке крови проходит определенный период времени, так называемый серонегативный период. Для различных инфекций и отдельных людей он может быть неодинаков. По прошествии этого периода, первыми начинают вырабатываться IgM, пик их концентрации приходится на период максимальных проявлений клинических признаков острой инфекции. Именно поэтому IgM принято считать маркером острой фазы заболевания. Специфические IgM начинают выявляться с 1-2 недели после заражения, их титр постепенно нарастает и достигает максимальных значений к концу первого месяца, затем снижается. В последующем содержание IgM в сыворотке крови снижается. В 70% случаев антитела класса М циркулируют до 3 месяцев после заражения, в 10% случаев - больше года. Через определенное время после появления IgM, которое для каждой инфекции свое, начинают вырабатываться IgA A - антитела, основная часть которых концентрируется на слизистых оболочках, где реализуется их защитная функция. С отставанием на 1-2 недели начинает увеличиваться титр IgG. Этот период соответствует стадии перехода инфекции из острой в хроническую фазу. Специфические IgG начинают определяться со 2 недели, их содержание достигает максимальных величин через 1-2 месяца, затем волнообразно снижается, но сохраняется пожизненно. Обнаружение IgG не имеет самостоятельного значения, однако свидетельствует об инфицированности человека и наличии в его организме возбудителя в неактивном состоянии. Если в какой-то момент происходит обострение хронической инфекции, то наблюдается новый всплеск IgM с последующим увеличением титра IgG, соответствующим фазе затихания заболевания. Если организм справляется с инфекцией (сам или с помощью медикаментов), то IgG могут еще длительное время (а для некоторых инфекций и пожизненно) оставаться повышенными. Для кори, дифтерии, паротита и других инфекций наличие специфических иммуноглобулинов является надежным барьером против повторного инфицирования. К сожалению, это не относится к урогенитальным инфекциям, иммунитет против которых не развивается. Таким образом, в зависимости от давности заражения и характера иммунного ответа в ходе инфекционного процесса могут обнаруживаться различные количества антител различных классов.

Что такое авидность?

Авидность - это характеристика, которая свидетельствует о прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. Эту характеристику обычно используют по отношению к IgG, которые обладают низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген, в начале заболевания и некоторое время после выздоровления. Низкоавидные IgG-антитела, в среднем, выявляются в течение 3-5 месяцев от начала инфекции, но иногда вырабатываются и в течение более длительного срока. Само по себе выявление низкоавидных IgG-антител не является безусловным подтверждением факта свежего инфицирования, но служит дополнительным подтверждающим свидетельством в ряду остальных серологических тестов. Затем развитие иммунного процесса постепенно идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоавидных IgG-антител, которые более прочно связываются с соответствующими антигенами. Высокая авидность IgG позволяет исключить недавнее первичное инфицирование. При реактивации инфекции выявляются специфические IgG высокой авидности. Определение авидности дает дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на различные инфекции, особенно во время беременности или при ее планировании.

Как оценивать результат?

При анализе результатов не стоит забывать, что каждая лаборатория ориентируется на свои нормальные показатели, поэтому оценивать результат анализа можно только имея перед глазами нормальные значения всех показателей для конкретной лаборатории. Закономерность появления специфических иммуноглобулинов различных классов имеет большое практическое значение, помогая определять не только факт, но и время инфицирования. При определении антител можно сделать вывод о том, как давно произошло заражение: при обнаружении только антител IgM человек заразился совсем недавно. Если же обнаруживается только IgG, а IgM отсутствует, то заражение произошло давно, и организм уже выработал иммунитет.

Фаза заболевания	IgM	IgA	IgG
Отрицательный результат	—	—	—
Первые 2 недели	—	+	—
2,5 - 3 неделя	+	+	—
3 - 4 неделя	+	+	+
Выздоровление	—	Снижение титра в 2-4 раза после лечения	Снижение титра в 4 раза после лечения
Хроническая фаза	—	+/—	+
Обострение (через 2 недели после начала обострения)	—	+	+
Излеченная инфекция	—	—	+

К сожалению, такое важное преимущество ИФА, как количественное определение антител, не имеет большого значения в практической работе - т.е. не позволяет точно установить диагноз и не влияет на дозировку и сроки назначения лекарственных средств. При обнаружении иммуноглобулинов различных классов (IgM, IgG, IgA) не стоит забывать о том, что это только антитела, а не сами возбудители. Поэтому между обнаружением в крови и других средах антител и наличием в организме инфекции никогда нельзя ставить знак равенства.

Что необходимо для подтверждения диагноза?

Хотя иммуноферментную диагностику нельзя считать абсолютно совершенной, она, тем не менее, достаточно надежна и точна. При диагностике желательно учитывать следующие моменты. Во-первых, стремиться к проведению исследования в самом раннем сроке от начала заболевания. Во-вторых, определять одновременно специфические антитела разных классов, как минимум M и G. Это особенно необходимо для диагностики первичной инфекции. Кроме того, исследование IgG необходимо проводить в парных сыворотках с интервалом не меньше 10 дней. В-третьих, использовать количественное определение антител, для оценки их динамики во времени. В-четвертых, использовать анализ уровня авидности IgG для дифференциации активной и скрытой инфекции. В-пятых, нужно иметь в виду, что антитела могут не выявляться у лиц со сниженным иммунитетом в результате перенесенных ранее инфекций, при белковом голодании и т.д. Для постановки диагноза, кроме ИФА, используют лабораторные тесты для идентификации возбудителя, инструментальные методы обследования и клиническую диагностику (клинический опыт врача). Естественно, что только по наличию тех или иных антител не может быть поставлен достоверный диагноз заболевания. Необходимо одновременно выявлять антитела к возбудителю методом ИФА и выявлять возбудителя методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) или ПИФ (прямая иммунофлюоресценция). Не стоит забывать, что качество Вашего обследования и лечения зависят от Вашего доктора и от Вас. Тесное сотрудничество с доктором и активное участие в обследовании позволит ему поставить правильный диагноз и назначить правильное лечение. Ваше здоровье - в Ваших руках!