Диагностика хеликобактериоза

Методы исследования при постановке диагноза и проведении дифференциального диагноза функциональной диспепсии можно разделить на основные, которые следует применять у всех больных с синдромом диспепсии, и дополнительные, назначение которых определяется специальными показаниями. Диагностика инфекции H. pylori относится к числу основных методов.

Микробиологическая диагностика хеликобактериоза

Микробиологическая диагностика Helicobacter pylori (НР) отличается своей технической сложностью и дороговизной. Поскольку биоптат слизистой оболочки желудка или двенадцатиперстной кишки извлекается в эндоскопичесом отделении, а его исследование проводится в микробиологической лаборатории, то существует проблема транспортировки материала. Данную проблему осложняет то, что Helicobacter pylori является микроанаэрофилом, то есть концентрация кислорода в атмосферном воздухе слишком высока для него и кислород губительно действует на микроорганизм. Одной из лучших транспортных сред является 0,5 мл 20% раствора глюкозы. При температуре +4ºС биоптат может сохраниться в ней в течении 5 часов без потери жизнеспособности бактерий. Helicobacter pylori растет в микроанаэростате с использованием газогенераторных пакетов. Оптимальный температурный режим для роста +37ºС. Время инкубации в термостате – 3-5 дней. При окраске по Граму бактерия окрашивается Грам – отрицательно.

Морфологические методы выявления Helicobacter pylori достаточно надежны и их даже называют «золотым стандартом». В настоящее время существуют как гистологические методы диагностики геликобактериоза (поиск микроба в гистологическом биоптате слизистой оболочки желудка), так и цитологические методы (поиск микроба в раздавленном биоптате). Обнаружить Helicobacter pylori можно на обычных, окрашенных гематоксилином и эозином препаратах, если они достаточно тонкие и хорошо окрашены. Однако целесообразно проводить элективные методы окраски. Лучшими из них являются: по Граму, по Романовскому-Гимзе, по Вартину-Старри (кстати, именно при этой окраске биоптатов их и обнаружили в 1983 г.), акридиновым оранжевым, карболовым фуксином, толуидиновым синим. В зависимости от того, какая методика применяется в лаборатории лечебного учреждения, такую и целесообразно использовать, поскольку чувствительность их близка, хотя считаются более чувствительными окраски по Гимзе, Граму и акридиновым оранжевым (85% и 79% соответственно). При выполнении микробиологических и морфологических методов выявления Helicobacter pylori необходимо учитывать, что микроб обычно колонизирует неравномерно, и в биоптат могут не попасть колонии Helicobacter pylori. Для повышения точности исследования необходимо брать несколько биоптатов, поднимаясь от пилорического отдела желудка к кардии (3-5 кусочков). Описанные методики не только достаточно дороги, требуют высокой диагностической техники, но и результат исследования получается через несколько дней (7-10). В настоящее время имеются методики, позволяющие достаточно легко проводить цитологическое выявление Helicobacter pylori в мазке желудочной слизи [Морозов И.А., 2000].

Helicobacter pylori в гистологических препаратах (цитологических) определяют при увеличении х 630, а лучше – х 1000. Оценивают степень обсемененности при увеличении х 630: 1) слабая степень – до 20 микробных тел в поле зрения, 2) средняя степень до 50 микробных тел в поле зрения; 3) высокая степень – более 500 микробных тел в поле зрения. Если исследования проводятся с использованием светового микроскопа при увеличении х 1000, то оценку обсемененности слизистой проводят по следующим критериям: «О» степень – нет микробных тел, «1» – 1-9 микробных тел в поле зрения, «2» – 10 – 29 микробных тел в поле зрения, «3» – 30-99 микробных тел в поле зрения, «4» – 100 и более микробных тел в поле зрения [Tokunaqa Y.et al., 1998] Для ускорения диагностики предлагаются инвазивные методики, дающие результат непосредственно во время исследования. Из них можно назвать такие биохимические тесты, как промышленно выпускаемые системы CLO- тест, Кампи-тест, Хелпил-тест и др. Они основаны на способности Helicobacter pylori разрушать мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. При этом в случае внесения биоптата в раствор мочевины с индикатором типа фенолрот меняется окраска раствора. Однако, не смотря на высокую чувствительность, эти тесты могут давать отрицательные результаты в связи с отсутствием Helicobacter pylori в биоптате. В последнее время для повышения чувствительности исследования предложены иммунологические тесты, выполняемые непосредственно на слизистой желудка о время эндоскопии. Во время эндоскопии на слизистую наносят специальные антисыворотки против Helicobacter pylori или раствор мочевины с индикатором (см. ниже) и по изменению окраски слизистой судят о наличии микроорганизма.

Значительно более простым и эффективным способом диагностики хеликобактериоза считается использование неинвазивных биохимических и иммунологических тестов.

Биохимические методы диагностики хеликобактериоза

Биохимические методы диагностики хеликобактериоза в настоящее время распространяются повсеместно. Они основаны на способности Helicobacter pylori расщеплять мочевину. Для исследования используется мочевина, меченная изотопами углерода C¹³ и C¹⁴. Это так называемые уреазные дыхательные тесты.

При их проведении пациент после пробного завтрака получает 20,0 воды, содержащей мочевину, меченную изотопом углерода. Спустя 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120 минут пациент выдыхает воздух в специальный сосуд, содержащий вещества, связывающие выдыхаемый углекислый газ, или на специальную пластину. В зависимости от количества выделяемого меченного углекислого газа судят о наличии или отсутствии НР на слизистой желудка. Диагностическая чувствительность и специфичность данных тестов превышает 95%. Однако работа с мочевиной, меченной C¹³, требует очень дорогого оборудования (до 250000 долларов США), а изотоп C¹⁴ обладает радиоактивностью. Близкие методики предполагают использование мочевины, содержащей изотоп азота N¹⁵. По выделяемому с мочой меченному азоту в течение 2 часов получают результат исследования. Чувствительность этого метода составляет 96% при 100% специфичности.

В настоящее время в широкую практику входит уреазный дыхательный тест с использованием нерадиоактивной мочевины. В выдыхаемом пациентом воздухе автоматически определяется уровень аммиака, а не радиоактивного азота. Газоанализаторная аппаратура для этого исследования выпускается в нашей стране и отличается низкой ценой при высокой чувствительности и портативности.

Используемая в настоящее время диагностическая система Pronto Dry позволяет выявлять инфицированность Helicobacter pylori непосредственно при выполнении эндоскопического исследования в течение 5 минут. Для этого достаточно нанести на слизистую желудка специальный реактив и по изменению окраски судить о наличии или отсутствии Helicobacter pylori.

Биохимические методики диагностики хеликобактериоза в настоящее время считаются наиболее удобными для скрининг-диагностики и оценки эффективности эрадикации Helicobacter pylori.

Иммунологические методы диагностики хеликобактериоза

Иммунологические методы диагностики хеликобактериоза в настоящее время успешно конкурирует с биохимическими методиками. Они основаны на определении специфических анти-Helicobacter pylori. антител классов А, М, G в крови больного. Наиболее употребительными являются методики с использованием иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA). В настоящее время, как в нашей стране, так и за рубежом, выпускаются специфические антисыворотки, позволяющие не только определять Helicobacter pylori. как вид, но и его штаммы различной патогенности. Чувствительность этих тестов очень высока. Так тест-система BIOMERICA имеет чувствительность 99,4%, специфичность 93,5%, точность – 97,4%. Они минимально затруднительны для больного. Для исследования достаточно 5 мл венозной крови.

ELISA–тесты считаются идеальными в педиатрической практике, при массовых обследованиях населения. Однако у них есть один недостаток – невозможность использования для быстрой оценки эффективности эрадикации Helicobacter pylori, поскольку специфические антитела медленно исчезают из крови больного. Этот процесс может растянуться до 6 месяцев.

В педиатрическую практику внедряется ELISA - диагностика хеликобактериоза, использующая в качестве субстрата не кровь, а кал пациента. Считается, что чувствительность этого метода не на много ниже «кровяного», но при этом для исследования не требуется венозная кровь.

В настоящее время в практике используется и диагностика хеликобактериоза с использованием полимеразной цепной реакции. Методика достигает 100% чувствительности и специфичности. Субстратом являются биоптат слизистой желудка, мазок или соскоб желудочной слизи. Полимеразная цепная реакция может быть использована для быстрой оценки эффективности эрадикации возбудителя.

Список литературы

Ивашкин В.Т., Шептулин А.А., Трухманов А.С. Эффективность применения ганатона (итоприда гидрохлорида) в лечении больных функциональной диспепсией // Фарматека. – 2009. – № 13. – С. 50–54.
Картавенко И.М. Морфофункциональная оценка двенадцатиперстной кишки у лиц с функциональной диспепсией: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. – М., 2008. – 23 с.
Охлобыстина О.З. Некоторые особенности патогенеза, клиники, диагностики и лечения синдрома функциональной диспепсии: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. – М., 2007. – 24 с.
Пюрвеева К.В., Лапина Т.Л., Ивашкин В.Л. и др. Значение сывороточных показателей пепсиногена I, пепсиногена II и гастрина-17 в диагностике атрофического гастрита // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. – 2005. – Т. 15, № 3. – С.48–51.